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Elabscience Annexin V-APC/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品介紹

 更新時(shí)間:2024-03-14    點(diǎn)擊量:1109

Elabscience®自主研發(fā)的 Annexin V-APC/PI Apoptosis Kit,可用于檢測(cè)懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡。 Annexin V 是一種鈣離子依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生 凋亡時(shí),膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被熒光染料 APC 標(biāo)記的 Annexin V 結(jié)合,可 通過(guò)流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。 由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可與雙鏈 DNA 特異 性結(jié)合并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光,與 Annexin V 搭配使用,可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。 本試劑盒檢測(cè)喜樹(shù)堿誘導(dǎo)的 Jurkat 細(xì)胞凋亡效果如下圖所示:

image.png


實(shí)驗(yàn)操作:

一步法

1.細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300×g 離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2.取1~5×105重懸的細(xì)胞,300×g離心5min,棄上清。用 PBS 洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。

3.細(xì)胞懸液中加入5μL的 Annexin V-APC Reagent和5μL的PI Reagent (50μg/mL)。

4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。

5.立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-APC可用APC通道,PI優(yōu)先選擇 ECD 通道,其次是 PE 通道;如果樣本有 FITC通道的自發(fā)熒光,則選PerCP/Cy5.5 通道。

兩步法

1.細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300×g離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

2.取1~5×105重懸的細(xì)胞,300×g離心5min,棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入100μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。

3.細(xì)胞懸液中加入2.5μL的Annexin V-APC Reagent和2.5μL的PI Reagent (50μg/mL)。(由于兩步法分辨率更高,染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果;用戶(hù)亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后加入適量的染色液,用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。)

4.輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育 15~20 min。

5.加入400μL稀釋的 1×Annexin V Binding Buffer,混勻樣本。

6.立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

注:流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-APC可用APC通道,PI優(yōu)先選擇ECD通道,其次是PE通道;如果樣本有FITC 通道的自發(fā)熒光,則選擇PerCP/Cy5.5通道。

注意事項(xiàng):

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。

2. 檢測(cè)貼壁細(xì)胞時(shí),需收集誘導(dǎo)凋亡后產(chǎn)生的懸浮細(xì)胞,并與后續(xù)收集的貼壁細(xì)胞一起檢測(cè)。

3. 應(yīng)盡量避免消化貼壁細(xì)胞帶來(lái)的機(jī)械損傷。同時(shí),胰酶的消化液中應(yīng)盡量不含 EDTA,因?yàn)?EDTA

會(huì)影響 Annexin V 與磷脂酰絲氨酸的結(jié)合。

4. 如果使用含 EDTA 的胰酶,收集細(xì)胞后應(yīng)充分清洗,確保 EDTA 被去除干凈。

5. 染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。

6. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡

量注意避光保存。

7. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

產(chǎn)品選購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

E-CK-A217

Annexin V-APC/PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

20Assays

50Assays

100Assays

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