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Elabscience乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性比色法測試盒(E-BC-K771-M)現(xiàn)貨供應(yīng)

 更新時(shí)間:2024-03-14    點(diǎn)擊量:701

Elabscience乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性比色法測試盒(E-BC-K771-M)可用于以乳酸脫氫酶(LDH)釋放為指標(biāo)的細(xì)胞毒性檢測。

檢測原理:

乳酸脫氫酶催化乳酸和 NAD+反應(yīng)產(chǎn)生丙酮酸和 NADH,NADH在PMS作用下,將電子傳遞給 WST-8,產(chǎn)生黃色的產(chǎn)物,其在450 nm有特征吸收峰,從而可以通過比色法來定量乳酸脫氫酶的活性。

操作步驟:

樣本處理:

① 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)以下分類加樣(每一種分類至少三個(gè)復(fù)孔):

空白孔:100 μL 無細(xì)胞的培養(yǎng)液(推薦使用含 1%血清的低血清或無血

清培養(yǎng)液);

樣本對照孔:100 μL 待檢測細(xì)胞(約含 5000-10000 個(gè)細(xì)胞);

最大酶活對照孔:100 μL 待檢測細(xì)胞(約含 5000-10000 個(gè)細(xì)胞);

樣本測定孔:100 μL 待檢測細(xì)胞(約含 5000-10000 個(gè)細(xì)胞);

② 將 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于 37°C,含 5% CO2空氣及 100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。

③ 向步驟②中的空白孔,樣本對照孔中分別加入 10μL 的培養(yǎng)液向步驟②中的樣本測定孔中加入 10 μL 不同濃度的藥物刺激。

④ 37°C,含 5% CO2 空氣及 100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)細(xì)胞需求選擇適當(dāng)?shù)姆跤龡l件和時(shí)間)。

⑤ 在結(jié)束培養(yǎng)前 1h 從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板,在最大酶活對照孔中加入 10 μL 的試劑一,并反復(fù)吹打混勻;

⑥ 37°C,含 5%CO2空氣及 100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 1 h;

⑦ 將 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板用酶標(biāo)板離心機(jī) 400 x g 離心 5 min,吸取上清液待測。

注:若無酶標(biāo)板離心機(jī),可將細(xì)胞液用移液槍吸打均勻后,移取至離心

管中,使用普通離心機(jī)離心

樣本檢測:

① 取 96 孔酶標(biāo)板,按上述細(xì)胞培養(yǎng)過程劃分為空白孔、樣本對照孔、最大酶活對照孔和樣本測定孔,然后向各孔中加入50μL對應(yīng)的待測上清液。

② 向步驟①酶標(biāo)板各孔中加入50μL反應(yīng)工作液,酶標(biāo)儀震板5 s混勻。

③ 37°C,孵育10 min;(反應(yīng)時(shí)間可根據(jù)顯色深淺延長或縮短,建議測定多個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的OD值,以便于篩選,盡量控制樣品對照孔的OD值小于0.8,最大酶活對照孔的OD值小于 2.0)。

④ 向步驟③中各孔加入 20μL試劑五,混勻,終止反應(yīng)。

⑤ 酶標(biāo)儀上450 nm 波長處測定各孔OD值,并設(shè)定600 nm參比波長,扣除參比波長的OD值,為所需有效吸光度值

產(chǎn)品選購:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

E-BC-K771-M

乳酸脫氫酶(LDH)細(xì)胞毒性比色法測試盒

96T



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